标準的方法是以20毫升的琼胶培养基放入陪替氏培养皿内做成平面，上面加上预先培养的试验标準菌种，例如掺入了葡萄球菌的琼胶4毫升，而使之凝固，上面再放上一个外径8毫米的不鏽钢圆筒，筒内倒满青霉素稀释液之后，在35—37℃培养12—16小时。由于圆筒周围产生浓度梯度，葡萄球菌的繁殖被阻止于有效浓度範围之内而形成圆形的透明带。其直径d与青霉素浓度c之间的关係如下式所示：

d=klog10c+a（k、a为常数）

与标準青霉素液相比较，可求得青霉素浓度。测定链霉素时用枯草菌，氯霉素用大肠菌，四环素用八连球菌作繁殖试验。此外还有用圆形滤纸代替圆筒，使被检液渗入的滤纸法。