平板培养基製作方法如下：

平皿培养基

① 将培养皿洗净、乾燥，使各培养皿盖方向一致，用牛皮纸包好，或放入特製铁罐内，注明皿盖的方向。高压灭菌或乾燥灭菌后备用。

② 取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作檯内，先左手持三角瓶,右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞或硅胶赛(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞) ,同时将三角瓶转换至右手，而后左手拿平皿,以大拇指和中指将皿盖打开一缝， 至瓶口刚好伸人。三角瓶口经火焰烧灼后，倾入灭菌或溶化、冷却至55~60°C的培养基约15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上，以免沾染皿壁)，迅速盖好皿盖，置于桌上轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿底部,冷凝后即为平板培养基。有时凝固后的培养基表面有冷凝水，可将平皿盖打开倒置于37℃温箱，除去冷凝水，否则将影响平板分离培养效果。为防止冷凝水过多，也可将培养基冷却至45 ~ 50°C再倒平板。