自从特内波姆博士（Dr. Brigid Tenenbaum）从销魂城（Rapture）海床发现海蜗牛中含有的神奇物质ADAM以后，对基因学着迷的她就设法获得更多的ADAM来进行研究，可是海蜗牛的数量毕竟有限，从中产生的ADAM数量也很少。她在向销魂城的大型研究所求助无果后，只能向在销魂城地位仅次于安德鲁·雷恩（Andrew Ryan）的弗兰克·芳汀（Frank Fountain）求助。芳汀看到了ADAM作为一个产品的市场潜力，也打算把它当作今后夺取销魂城控制权的砝码。于是特内波姆博士加入了Fountain Futuristics研究所，和易苏崇博士（Dr. Yi Suchong）共同开发研究ADAM。但是ADAM的来源问题还是没有解决，此时特内波姆博士开始尝试将海蜗牛植入到人体当中，在经过多次试验后，发现在小孩的胃中植入海蜗牛获得ADAM最成功，寄主喝入ADAM后，可以产生十倍到二十倍可用的ADAM。新的问题接踵而至，作为寄主的实验体并不多，此时芳汀出面告诉特内波姆博士自己将建立小妹妹孤儿院（Little Sister`s Orphanage）借收养的名义来获得实验体。特内波姆博士对为何使用女孩表示不解，芳汀解释说这样孤儿院就可以少建一个浴室（因为只有女孩）。早期的小妹妹是确确实实的孤儿，但是后来内战爆发后，雷恩工业（Ryan Industry）的人就开始绑架城里的女孩作为实验体。

特内波姆博士

小妹妹的改造过程是毫无人性的，除了植入海蜗牛外，还对小妹妹进行精神调理（Mental Conditioning），以便其在销魂城内完成收集ADAM的任务，在生化奇兵2中，玩家会短时间以小妹妹的视角完成任务，经过精神调理后，她们看到的销魂城不再憎恶恐怖，而是鸟语花香，一派祥和，尸体成了天使，地上的血液变成了玫瑰花瓣。在这个过程中，特内波姆博士和易苏崇博士都参与了研究。

玛莎·卢茨（Masha Lutz）

玛莎·卢茨出生于一个工薪家庭，父母来自欧洲，虽然生活不宽裕，但一家人过得还算幸福。父母还带她到阿卡迪亚花园去玩。但是内战爆发以后，玛莎失蹤了，玛莎的父母开始满城搜寻她，最后在“尼普顿的慷慨”（Neptune`s Bounty）渔港中发现了已经变成小妹妹的玛莎，父母看到玛莎从死尸上收集ADAM以后和大老爹走了却丝毫不回应父母的呼唤，绝望之中，玛莎的父母服毒自杀。

萨利（Sally）

萨利在进入小妹妹孤儿院前的经历并不清楚，但当芳汀被雷恩干掉（假死）后，孤儿院倒闭，被三代游戏的主角布克·德维特（Booker Dewitt）在销魂城中的一个存在所收养。但是随后布克在赌场中赌博将萨利弄丢了，布克很着急，于是抓到了易苏崇博士，关了他十几个小时想得知萨利的下落，却一无所获。最后销魂城的安保总监沙利文（Sullivan）告诉布克她已经死了。但在海葬DLC中伊莉莎白告诉布克她能帮助其找到萨利。最后在芳汀商场（Fountain Department Store）找到了已经变成小妹妹的萨利，而绑架者则另有其人.......

辛迪·梅尔泽（CindyMeltzer）

辛迪·梅尔泽原先和自己的父亲马克·梅尔泽（Mark Meltzer）生活在岸上，一天辛迪失蹤了，马克心急如焚寻找辛迪，最后无意发现了销魂城，开始了一段冒险........

埃莉诺·兰姆（Eleanor Lamb）

埃莉诺·兰姆是第一个成功的Pair bond的实验体“实验体 Δ”的小妹妹，在内战爆发后，被雷恩囚禁的索菲亚博士逃出了监狱，伙同一群缝接者将埃莉诺从“实验体 Δ”那里“救走”，并用质粒的力量让他自杀。十年过去了，埃莉诺·兰姆在得知母亲要将自己将作为乌托邦人计画的实验品后，开始通过其他小妹妹找到了“实验体 Δ”的尸体，并生命室（Vita chamber）装置复活了他，联合特内波姆博士和奥古斯特·辛克莱（Augustus Sinclair）来帮助主人公找到自己，救自己离开销魂城

小妹妹的“诞生”并没有解决所有问题，自从销魂城内战爆发后，过量使用ADAM的市民变成了疯狂的缝接者（Splicers），四处搜寻ADAM以满足自己对其无限的饑渴（类似吸毒的效果，特内波姆博士的解释是一旦人使用ADAM，其身体内的基因开始重组，导致身体发生崩坏，而为了修补崩坏就只能再次使用ADAM，但最后成了恶性循环）。在城内四处游蕩收集ADAM的的小妹妹就成了这些怪物的理想目标。为了保护小妹妹，此时已经在安德鲁·雷恩（Andrew Ryan）手下干活的易苏崇博士和吉尔伯特·亚历山大博士（Dr. Gilbert Alexander）着手开发Big Daddy(“保护者” Protector)。实验体的获取此时已经很困难，但是雷恩向易苏崇博士打包票，很快就会有实验体送到实验室的。而这些实验体大多是反对雷恩专制独裁的异见者。大老爹早期的开发并不成功，因为大老爹对于小妹妹没有感情，经常自顾自的走开。易苏崇博士对此心急如焚，虽然他已经有了一丝眉目（生化奇兵·无限-海葬中，伊莉莎白发现了他的笔记），就是大老爹必须获得小妹妹提供的特定ADAM才能存活，但是还没能付诸实施，由于他打了一个小妹妹，结果被愤怒的大老爹钉死在实验台上，结束了他贪婪罪恶的一生。易苏崇博士死后，亚历山大博士接管了“保护者”项目，此时这个计画已经初见眉目，研发出了Protection Bond来精神上连线大老爹和小妹妹，但是他对此并不满意，因为大老爹虽然保护小妹妹，只要小妹妹不受到攻击，在大老爹看来就跟盆栽没什幺两样。于是着手开发新的Pair Bond，一个大老爹只能绑定一个小妹妹，一旦小妹妹走远或死亡，大老爹就会陷入昏迷抑或疯狂。第一批实验品“阿尔法系列”（Alpha Series）的第一个成功实验体就是生化奇兵2的主角“实验体 Δ”（Subject Delta Δ）。但是大老爹并不能在销魂城的武装竞赛战无不胜，还是会出现被杀害的小妹妹，而在Pair Bond下大老爹也只能一次性作废。此外，Pair bond的使用成本也偏高。无奈之下，只能重新使用Protection Bond，可以重複连线大老爹和小妹妹之间的关係。

实验体 Δ Subject Δ

特内波姆博士是一个天才，但却是一个某种意义上有缺陷的天才，这个缺陷就是同情心。她是一名犹太人，在德国的集中营里经历了犹太人大屠杀，但是由于她天赋稟异，成为德国军医的助手而侥倖逃过一劫。由于她过分沉迷于基因学研究，同胞们的苦难对她的心境没有造成什幺影响。来到销魂城以后，开发小妹妹时对于寄主的悲惨命运也没有表现应有的同情，甚至向斯坦门医生（Dr. J.S. Steinman）坦言，“收割”小妹妹不是杀戮，而不过是将生命维持装置从一个久病不愈的病人拿开而已。但是她在阿卡迪亚花园（Arcadia）看到小妹妹衣衫褴褛却蹦蹦跳跳地从死尸上收集ADAM的时候，她开始对自己的行为后悔不已，不久后退出了雷恩工业的研究所，开始秘密从事拯救小妹妹的行动，并开发了一个新的质粒（Plasmid）来帮助小妹妹能够摆脱精神调理的束缚。在生化奇兵1中，她将这种质粒交给主人公杰克，劝他用这个来拯救小妹妹。而在生化奇兵2中，她和“实验体Δ”以前的小妹妹埃莉诺·兰姆（Eleanor Lamb）合作，让他来拯救城里其他的小妹妹。

在生化奇兵1和2中，玩家在击败大老爹后，可以拯救或“收割”小妹妹。选择拯救的话，她可以摆脱以前的束缚，但是玩家获得较少的ADAM（对此特内波姆博士承诺会对玩家给予奖励）。选择“收割”的话，可以获得最多的ADAM，但小妹妹在这个过程会丧命。用阿特拉斯(Atlas)的话来说,玩家是在衡量自己的生存和他人的生存的重量，选择拯救，就是用自己的生存几率换取小妹妹的生存几率。

在生化奇兵2中，索菲亚·兰姆博士（Dr. Sofia Lamb）在一代游戏故事发生的十年后，接管了销魂城的大权。此时她有一个更大的计画，要创造乌托邦人，而这个乌托邦人的最好载体就是自己的女儿，曾经的小妹妹---埃莉诺·兰姆。而创造乌托邦人在兰姆博士看来，就需要大量的ADAM，而此时已经十年了，当年的小妹妹已经长大，不但不适合收集ADAM，而且精神变得很不稳定，只能被亚历山大博士改造成Big Sister（大姐姐）来协助大老爹保护和带回小妹妹。而城里的缝接者已经丧失了生育能力（至于是精神上还是生理上很难讲，二代主角在“粉色珍珠”（Pink Peral）红灯区看到一个女性缝接者被一个男性缝接者强制拖走，还有一个男性缝接者向一个女性缝接者搭讪，暗示缝接者应该是生理上丧失了生育能力）小妹妹的获取只能从“地表”（Surface）---从岸上---绑架到销魂城来製成新的小妹妹

索菲亚·兰姆博士

海葬2中，伊莉莎白最后牺牲了自己来完成自己在“这场戏”（卢特斯“兄妹”的说法 Lutece twins）中的“戏份”。在类似于死亡回放的过程中，伊莉莎白重新看到了“门”，在其中的一扇门中，她看到一代主人公杰克即将来到销魂城，告诉阿特拉斯“最后王牌”（Ace in the hole）的关键暗示是“Would you kindly”,在被阿特拉斯给予最后的致命一击后，她看到了各种各样的“门”，在一扇“门”的背后，她看到阿特拉斯（也就是芳汀）被小妹妹活活用针枪捅死，杰克拯救了所有的小妹妹，而后她无怨的死去了