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瘦肉精检测试剂

瘦肉精检测试剂

瘦肉精检测试剂

瘦肉精检测试剂是一种针对盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等最常用的瘦肉精产品含量快速检测试剂。

基本介绍

  • 中文名:瘦肉精检测试剂
  • 外文名:Clenbuterol detection reagents
  • 类型:检测试剂
  • 检测对象:瘦肉精
  • 包括内容:盐酸克伦特罗、莱克多巴胺等
  • 类型:盐酸克侖特罗速测卡、检测试剂盒

物质分类

作为“瘦肉精”使用的β- 激动剂主要有两种类型。一种是苯乙醇胺类,如盐酸克伦特罗(Clenbuterol,CL)和沙丁胺醇(salbutamol)等,另一种是双苯烷胺类,如莱克多巴胺(Ractopamine)等。口服CL对牛、鸡、猪和绵羊等动物都具有增加胴体肌肉组成和减少脂肪含量的作用,对增加体重和提高料肉比也有一定作用]。不同动物品种对β-激动剂的反应性不同。其中对绵羊的促生长作用最大,对鸡的作用最小,对牛、猪的作用中等。这可能是由于不同动物对β- 激动剂的反应性不同,也可能与动物的生长潜力有关。
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中毒事件

盐酸克伦特罗残留引起的中毒事件最早发生在西班牙,1989 年10 月至1990 年7 月间暴发因食用牛肝引起135 人中毒,这次中毒事件发生于食用牛肝后的30 min 至6 h,最长持续至40 h,共有43 个家庭中91%的成员受到影响。在食用的牛肝中发现CL含量达160~291 μg/kg。1992 年1 月至4 月又在该国北部地区暴发232 例中毒病例。从屠宰场获得的牛肝样品中CL 含量为19~5395 μg/kg。病人尿液中CL 含量为11~486 μg/L。
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1990 年秋季,在法国共有8个家庭22人发生CL中毒[5],中毒症状表现在食用牛肝后的1~3 h,发病1~3 d 后全部恢复。食用牛肝中CL含量达375~500μg/kg。在这些中毒事件中大多数病人中毒症状都表现为心悸、肌肉震颤、肌肉疼痛、神经症状、头晕头痛、兴奋、噁心呕吐、发热寒战等。中毒的发生无年龄(1~68 岁)和性别差异。
我国香港、上海、北京、浙江、广东、山东、河北、广西、黑龙江和安徽等地均有“瘦肉精”中毒事件报导,2001 年国家严格管控盐酸克伦特罗以来,莱克多巴胺、沙丁胺醇等“新型瘦肉精”使用呈上升趋势。但盐酸克伦特罗价格便宜,且毒性最大,世界範围内的中毒事件基本都是以盐酸克伦特罗为祸首。

毒害作用

当人们食用了含CL 残留的动物内脏和肉品后,常造成急性或慢性食肉中毒,出现心悸、心慌、噁心、呕吐、肌肉颤抖等临床症状。一般情况下,盐酸克伦特罗对于人体的危害主要是由于它在动物肝脏、肾脏、肌肉等组织器官中的残留所引起。消费者过量食用后,容易产生心血管毒性,表现为噁心、头晕、心率过快、肌肉震颤、高血糖、低血钾等症状,尤其对心血管疾病患者危害更大。
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检测方法

速测方法

本试纸採用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、组织和饲料中的盐酸克侖特罗。试剂含有被预先固定于膜上检测带(T)的盐酸克侖特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克侖特罗单克隆抗体。检测时样品和标记抗体竞争结合偶联物。检测限为3ng/ml(3ppb)。
样品製备
1、尿液:样本必须用洁净、乾燥不含有任何防腐剂的塑胶尿杯或玻璃容器收集。可直接检测,如有浑浊请先离心(3000rpm,5min)取上清。若不能及时检测送检,尿样样本在2-8℃冷藏可以保存48小时。长期保存需冷冻于-20℃,忌反覆冻融。
2、肉:装入大约4克碎的肉样本(肉泥)于离心管中(酱猪牛肉加2ml水或PBS),盖紧管盖,在80℃左右的水浴锅中水浴10 分钟;吸取煮出的溶液到1.5ml的离心管中。如有明显黄色浑浊请离心(3000rpm,5min),取上清检测。如果检测牛肉请吸出肉汤离心(3000rpm,5min),取上清检测。
3、饲料:取1g样品粉末于离心管中,加入5ml水,混匀,置于超音波水浴中超声30min(每10min取出混匀1次),超声提取后冷却至室温,于3000rpm离心5min,取上清液进行测试。
操作步骤
1、在进行测试前先仔细阅读使用说明书,使用前将本品和待检样本溶液恢复至室温。
2、吸取待检样品溶液,缓慢滴加80~100μl(约2~3滴)于加样孔中,加样后开始计时。
3、在5分钟内读取结果,超过5分钟的结果判读无效。
结果判定
阳性:位置C显示出红色条带,位置T无条带或颜色非常模糊时判为阳性。
阴性:位置C显示出红色条带,位置T同时出现红色条带时,判为阴性。
无效:位置C不显示出红色条带,则无论位置T显示出红色条带与否,该试纸卡均判为无效。

剂条检测

本品採用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术,套用单克隆抗体竞争结合盐酸克侖特罗偶联物和样品中可能含有盐酸克侖特罗的原理。试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的盐酸克侖特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克侖特罗单克隆抗体。本产品的检测盐酸克侖特罗浓度3ng/ml(3ppb)以上为阳性。
样品製备
1、饲料:样品粉碎后过20目筛,得试样。取2g试样于50ml离心管中,加入10ml水,混匀,置于超音波水浴中超声30min(其间每10min取出混匀1次),超声提取后冷却至室温,于2500rpm离心5min,取上清液进行测试。
2、尿液:用尿液直接进行测试,如有浑浊请先离心取上清。尿液标準必须收集在洁净、乾燥不含有任何防腐剂的塑胶尿杯或玻璃容器内。若不能及时检测送检,尿样标準在2-8℃冷藏可以保存48小时。长期保存需冷冻于-20℃,忌反覆冻融。
猪肉猪肉
3、肉:装入大约4克碎的猪肉样本(肉泥)于离心管中,盖紧管盖。将装样品的离心管在微沸的水浴锅中水浴10 分钟;吸取3滴以上(约100ul)煮出的溶液到1.5ml的离心管中。如有明显黄色浑浊请离心,使用上清液作为待测样品溶液。
操作步骤
1、在进行测试前先完整阅读使用说明书,
2、从原包装中取出试剂,打开后平放在桌面上,请在1小时内儘快使用。
3、用滴管吸取待检样品溶液,缓慢滴加3滴于加样孔中,加样后开始计时。
4、结果应在10分钟读取,超过20分钟的时间判读无效。
结果判定
阳性:位置C显示出红色线条,而位置T不显色时;或者位置C显示出红色线条,位置T显示颜色非常模糊时判为阳性。
阴性:位置C显示出红色线条,位置T同时显示出红色线条,且T线颜色接近C线或者深于C线时,判为阴性。
无效:位置C不显示出红色线条,则无论位置T显示出红色线条与否,该试纸卡判为无效。请儘快与当地供应商联繫。

试剂盒法

测定的基础是抗原抗体反应。微孔板上包被有针对兔IgG(Clenbuterol抗体)的羊抗体,含有克伦特罗抗原的样品或标準品与酶标记物被加入到小孔中,经过孵育及洗涤步骤后,游离的抗原与抗原酶标记物竞争抗体结合位点,没有结合的抗原酶标记物在清洗步骤中被除去,将显色液加入到孔中并且孵育,结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝色转为黄色。在450nm处测量,吸光强度与样品的克伦特罗浓度成反比。
操作步骤
称取1克剪碎或匀浆过的样品,置于提取液瓶中,后再加入一瓶固体提取剂,扭紧管盖,振摇样品一分钟后,在100℃水浴中水浴加热5分钟。取出后冷却至室温,取清亮液体直接加样。
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从检测卡袋中取出所需的检测卡,放置室温,在卡上做好样品编号标记。用一次性取样滴头吸取样品,滴入加样孔,每孔4滴,在加液过程中勿使液体溢出加样孔。5-10分钟内观察结果,10分钟后的结果无效。
结果判定
阴性: 对照线(C)和测试线(T)同时出现,表明样品中克伦特罗的浓度小于3ng/ml。
弱阳性:对照线(C)和测试线(T)同时出现,测试线(T)明显浅于对照线(C),表明样品中克伦特罗浓度大于3ng/ml而小于5ng/ml。
阳性: 只有对照线(C),无样品测试线(T),表明样品中克伦特罗的浓度大于5ng/ml。
无效: 对照线(C)和测试线(T)都不出现。或者对照线(C)不出现。

综合治理

1997 年3 月25 日,我国农业部发布了《关于严禁非法使用兽药的通知》,严禁将β- 肾上腺激动剂等药物作为动物促生长剂使用。
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1997 年9 月4 日,农业部发布《动物性食品中兽药最高残留限量》,规定CL 在马、牛肌肉、肝脏、肾脏及牛奶中的最高残留限量(Maximum Residue Limit,MRL)分别为0.1、0.5、0.5 和0.05 μg/kg,日允许摄取量(AcceptableDaily Intake,ADI)为0~0.004μg/kg/d。
由于香港特区政府卫生署1998 年5 月14 日公告在内地供港的活猪内脏中查出含有违禁药物的残留成分—盐酸克伦特罗。为保证食品卫生安全,特区政府卫生署已做出禁止在市场上销售内脏的决定。为确保供港活猪的卫生质量,1998 年6 月19 日,对外贸易经济合作部、农业部、国家出入境检验检疫局联合下发《关于严禁非法使用兽药和加强检疫工作等有关事项的通知》。
为加强饲料及养殖环节质量安全监管,保障饲料及畜产品质量安全,2010 年12 月27 日,农业部根据《饲料和饲料添加剂管理条例》有关规定,颁布第1519 号公告[31],禁止在饲料和动物饮水中使用苯乙醇胺等11 种物质,其中苯乙醇胺A、班布特罗、盐酸齐帕特罗、盐酸氯丙那林、马布特罗、西布特罗、溴布特罗、酒石酸阿福特罗、富马酸福莫特罗等9 种为肾上腺素受体激动剂。要求各级畜牧饲料管理部门加强日常监管和监督检测,严肃查处在饲料生产、经营、使用和动物饮水中违禁添加苯乙醇胺等物质的违法行为。

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