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蛋白质N端测序

蛋白质N端测序

蛋白质N端测序的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。

基本介绍

  • 中文名:蛋白质N端测序
  • 意义:所有的蛋白质合成都起始于N-端
  • 分类:非质谱技术
  • 原理:Edman化学降解法

蛋白质意义

几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端,蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期,同时关联着蛋白亚细胞器定位等,这些与蛋白的功能和稳定性息息相关,对蛋白进行N-端测序分析,有利于帮助分析蛋白质的高级结构,揭示蛋白质的生物学功能。

序列的方法

目前对蛋白N端测序主要分类两大类,其一为非质谱技术,例如经典的Edman降解法、利用反转录RT-PCR得到对应蛋白的cDNA,再来反推得到蛋白序列;其二为质谱技术。各自都有其使用的长处和制约之处,目前,市面上採用的,依然是基于经典的Edman降解法原理,利用美国ABI公司Procise491蛋白序列测序系统进行蛋白N-端测序。

测序的原理

蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的,Edman化学降解,其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联,苯氨基硫甲醯酞(PTC-肽)环化裂解,和噻唑呤酮苯氨(ATZ)转化为苯异硫尿胺基酸(PTH-胺基酸)三个主要的化学步骤,每个循环从蛋白质与多肽裂解一个胺基酸残基,同时暴露出新的游离的胺基酸进行下一个Edman降解,最后通过转移的PTH-胺基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。

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