上泉信纲创立了新阴流，而将新阴流剑技发扬光大的，则是上泉信纲的弟子柳生石舟斋宗严。

柳生家是大和的豪族，柳生宗严曾先后仕官于三好长庆及织田信长，后託病辞官而潜心研究剑法。在得到上泉信纲的传授后，将鹿岛新当流与户田一刀流融合于新阴流剑技中，创立了新阴流的最大的一个分支——柳生新阴流。此后宗严之子柳生宗矩及宗矩之子柳生三严（柳生十兵卫）将柳生新阴流加以不断发展和完善，使柳生新阴流成为江户时代最大的剑术流派之一。柳生宗严、柳生宗矩及柳生十兵卫三人则成为战国末期至江户初期着名的三剑士，人称“柳生三天狗”。

柳生家传兵法书（即剑术书）有《杀人刀》、《活人剑》、《无刀之卷》，以及后来由十兵卫撰写的《月之抄》。柳生新阴流的真髓在于“无刀取”，即以空手制住对手（类似中国武术的“空手入白刃”）。与有些流派相比，柳生新阴流不赞成以杀戮来磨鍊剑技。在《活人剑》及《无刀之卷》中，都体现了柳生“无刀取”的意义： “不杀人，我们以不被杀为胜。”